Formation à la cryo-tomographie électronique - Du lundi 04/12/2017 au vendredi 08/12/2017
Formation à la cryo-tomographie électronique organisée par Denis Chrétien, Claire Heichette (équipe Tubulin and Interacting Proteins) et Sophie Chat (équipe Ribosome, Bactéries et Stress)
Cet atelier est proposé par CNRS Formation Entreprises. Il se déroule sur une semaine et permet de se former à l'acquisition de cryo-tomogrammes et à leur reconstruction en 3D à l'aide du logiciel eTomo
Objectifs
- Acquérir les bases théoriques de la cryo-tomographie électronique
- Savoir préparer un spécimen vitrifié en présence de marqueurs fiduciaires (nanoparticules d'or)
- Savoir acquérir des séries d'images inclinées en faible dose d'électrons
- Savoir reconstruire en 3D des cryo-tomogrammes à partir de séries d'images inclinées
Public
Chercheurs, ingénieurs, techniciens. Afin d'adapter le programme aux attentes des stagiaires, un questionnaire téléchargeable ICI sera à compléter par les stagiaires et à renvoyer avant le début du stage.
Prérequis
Notions de base théoriques en microscopie électronique en transmission
Programme
L'objectif de ce stage essentiellement pratique est d'apporter suffisamment d'autonomie aux stagiaires afin qu'ils puissent mettre en œuvre la cryo-tomographie électronique dans leur service ou participer à des acquisitions et/ou analyses sur des plateformes de cryo-microscopie électronique de partenaires
Cours (4 h)
- Introduction à la microscopie électronique
- Introduction à la cryo-tomographie électronique
- Limite et perspectives de la cryo-tomographie électronique
Ateliers pratiques (27 h)
- Préparation des spécimens en présence de marqueurs fiduciaires
- Vitrification des spécimens en films minces
- Acquisition de données par cryo-tomographie électronique simple axe
- Reconstructions 3D à l'aide du logiciel IMOD
- Analyse des données sous 3Dmod
- Visualisation sous UCSF Chimera
Les échantillons biologiques (virus, axonèmes... ) seront fournis lors de la formation
La dernière demi-journée (4 h) sera consacrée à l'analyse de cas posés par les stagiaires (questions spécifiques, etc.)
Equipements
- Appareil de vitrification sous atmosphère contrôlée (Leica EM GP)
- Cryo-microscope électronique 200 kV équipé d'une caméra CCD (Tecnai G2 T20 Sphera, Gatan USC4000)
- Stations graphiques (Mac Pro équipés de cartes graphiques NVIDIA)
